在感染免疫與疫苗相關的研究工作當中,抗原類材料直接關系到實驗數據的可信程度,不同來源的樣本與檢測平臺之間的適配,是很多項目推進過程中需要反復權衡的部分。
英國Nativeantigen試劑可服務于血清學分析、候選疫苗評估等多個研究方向,研究人員需要結合自身的實驗設計,做好樣本基質、檢測方法之間的匹配工作。
開展血清學相關實驗時,樣本基質的干擾會給最終結果帶來不可忽視的影響。常見的待測樣本包含血清、血漿以及細胞培養上清這3類,不同基質內部含有的蛋白、脂類以及各類小分子組分存在差異,部分組分容易引發非特異性結合,抬高背景信號。在正式批量實驗啟動之前,可以安排2組預實驗,一組使用緩沖液稀釋抗原體系,另一組加入目標樣本基質,對比兩組信號區間,以此判斷基質是否會對體系帶來明顯干擾。部分研究人員直接沿用文獻當中的稀釋比例,忽略自身樣本的個體差異,會出現陽性信號區分度下降,組間重復波動變大的情況。
抗原的分子構象狀態,會直接左右免疫識別的過程。很多免疫反應識別的是蛋白天然折疊之后的空間結構,一旦構象發生改變,抗體結合位點就會出現變化,即便蛋白總量沒有變化,檢測信號也會出現明顯偏移。在選擇實驗方案時,需要區分實驗目的,若研究方向偏向抗體與天然病原體的相互作用,需要保證抗原維持原有空間折疊狀態;如果僅針對線性表位開展分析,則可以接受變性處理的條件。不同表達系統產出的抗原,糖基化修飾水平存在區別,這類修飾會影響抗原與抗體之間的識別效果,項目前期需要確認抗原制備方式和自身研究目標是否契合。
不同檢測平臺對于抗原材料的要求各有側重,酶聯免疫、化學發光、膠體金快速檢測這3種平臺,固相載體的結合模式不一樣。固相載體吸附能力存在上限,抗原投放量過高會造成堆疊脫落,投放量不足則信號偏弱。可以設置5個梯度開展預滴定,找到信號與背景比值合適的區間,而不是直接套用公開資料當中的參考比例。部分項目會將抗原用于細胞層面的刺激實驗,此時除分子構象之外,還需要考量內毒素相關指標,內毒素水平偏高會激活細胞固有免疫通路,造成實驗結果偏離真實的免疫應答水平。
項目周期較長的課題,批次之間的一致性需要納入整體考量。科研項目往往會跨越多批次材料完成全部測試,不同批次之間的細微差異,會增大組內變異,給數據對比帶來阻礙。在條件允許的前提下,優先規劃實驗樣本,盡量使用同一批次材料完成同一組對照與待測樣本。如果項目跨度必須使用多批次,就要設置統一的參照樣本,每一輪實驗都同步測定參照樣本,借助參照樣本的信號浮動,校準不同批次之間帶來的偏差。很多課題在論文投稿階段,審稿人會關注不同批次之間的比對數據,提前做好參照體系,也能夠簡化后期資料整理工作。
合理規劃樣本、平臺、材料三者之間的適配,能夠減少實驗反復調試的時間,把精力更多放在研究問題本身。英國Nativeantigen試劑為感染免疫方向提供可選的實驗材料,而最終實驗質量,依舊依靠完整的預實驗設計與對照體系來保障。